Ферменты метаболизма эстрогенов и их рецепторы при раке молочной железы - G-3 эстрогены рецепторы 8б , прогестероны 7б нер-1 негативный онко - 11 Октября 2015

Год:

Автор научной работы:

Шашова, Елена Евгеньевна

Ученая cтепень:

кандидат медицинских наук

Код cпециальности ВАК:

14.00.14

Специальность:

Онкология

Количество cтраниц:

125

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Шашова, Елена Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Обзор литературы.

1.1 Характеристика метаболизма эстрогенов.

1.1.1 Синтез эстрогенов.

1.1.2 Рецепция эстрогенов.

1.1.3 Инактивация эстрогенов.

1.2 Роль эстрогенов в канцерогенезе.

1.2.1 Промоторный тип гормонального канцерогенеза.

1.2.2 Генотоксический тип гормонального канцерогенеза.

1.3 Особенности метаболизма и рецепции эстрогенов при раке молочной железы.

1.3.1 Ферменты метаболизма эстрогенов при раке молочной железы.

1.3.2 Рецепторы эстрогенов и прогестерона при раке молочной железы.

1.3.3. Роль ферментов метаболизма эстрогенов и их рецепторов в метастазировании и рецидивировании рака молочной железы.

1.3.4. Связь ферментов метаболизма эстрогенов с клинико-морфологическими параметрами при раке молочной железы.

ГЛАВА 2. Материал и методы исследования.

2.1 Материал и объект исследования.

2.2 Методы исследования.

2.2.1 Определение активности ароматазы.

2.2.2. Определение активности стероид сульфатазы.

2.2.3. Определение активности 2,4-эстрогенгидроксилаз.

2.2.4. Определение активности катехол-О-метилтрансферазы.

2.2.5. Определение активности глютатионтрансферазы.

2.2.6. Определение содержания рецепторов эстрогенов и прогестерона.

2.2.7. Определение содержания белка по методу Лоури.

2.2.8. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. Результаты исследований и их обсуждение.

3.1. Ферменты метаболизма эстрогенов в неизмененной, опухолевой ткани и лимфогенных метастазах при раке молочной железы.

3.2. Рецепторы эстрогена и прогестерона в неизмененной, опухолевой ткани и лимфогенных метастазах при раке молочной железы.

3.2.1. Содержание рецепторов эстрогенов и прогестерона в тканях при раке молочной железы.

3.2.2. Сопоставление активности ферментов метаболизма эстрогенов со статусом рецепторов женских половых гормонов.

3.3. Активность ферментов синтеза и метаболизма эстрогенов в тканях больных РМЖ и основные клинико-морфологические параметры.

3.4. Прогностическая значимость активности ферментов метаболизма эстрогенов и содержания рецепторов эстрогенов и прогестерона в тканях больных РМЖ.

Введение диссертации (часть автореферата) На тему "Ферменты метаболизма эстрогенов и их рецепторы при раке молочной железы"

Актуальность проблемы Злокачественные новообразования молочных желез занимают лидирующее место в структуре онкологических заболеваний женщин в мире. Статистические данные констатируют ежегодное увеличение числа диагностируемых случаев рака молочной железы (РМЖ). В мире выявляют около 1 млн. новых случаев за год, к 2010г. прогнозируется рост числа заболевших до 1,45 млн [12]. Отмечается

U ^ W неуклонный рост численности больных, увеличение показателей смертности и возникновение злокачественных новообразований этой локализации в более раннем возрасте по сравнению с прошлыми десятилетиями [41]. Развитие и биологические характеристики РМЖ во многом определяются метаболизмом эстрогенов [3]. Показан широкий спектр важных функций, которые регулируются эстрогенами, связываясь с внутриклеточными рецепторами и активируя экспрессию различных генов [78]. К наиболее важным проявлениям действия эстрогенов относят активацию пролиферации [90], ингибирование процесса апоптоза, а так же стимуляцию выработки факторов роста (трансформирующий фактор роста а, эпидермальный фактор роста) [29; 63]. Вышеперечисленные эффекты могут обуславливать развитие пролиферативных гиперпластических процессов и рака в эстроген-звисимых тканях, в которых имеются рецепторы эстрогенов [42].

Эстрогены могут образовываться непосредственно в тканях или захватываться из циркулирующей крови. Внутриорганная выработка эстрогенов в молочной железе преимущественно осуществляется ферментами локального синтеза: ароматазой, которая способствует конверсии андрогенов в эстрогены, а так же стероидсульфатазой, преобразующей неактивный эстрон сульфат в эстрон [144]. Влияние эстрогенов на клетки опосредовано их взаимодействием с рецепторами. Комплекс гормона с рецепторами транслоцируется в ядро, активирует соответствующие гены и стимулирует пролиферацию ткани молочной железы, а так же ингибирует апоптоз. В процессе пролиферации увеличивается вероятность появления мутаций и ограничивается время, необходимое для репарации повреждений, что играет важную роль в развитии злокачественных опухолей [14]. При адекватной работе системы инактивации эстрогенов проявление генотоксического эффекта опосредованно снижается за счет работы ферментов глютатионтрансферазы (rST) и катехол-О-метилтрансферазы (КОМТ), которые препятствуют повреждению ДНК [149; 160]. В противном случае, не связавшиеся с рецептором эстрогены и их производные - катехолэстрогены, которые образуются под действием 2- и 4-эстрогенгидроксилаз, способны оказывать ДНК-повреждающее действие [120]. Усиление процессов пролиферации и непосредственное генотоксическое действие эстрогенов является важным патогенетическим звеном в канцерогенезе, развитии первичной опухоли, дальнейшей опухолевой прогрессии РМЖ.

В настоящее время при определении прогноза заболевания и выбора наиболее адекватной тактики лечения больных РМЖ основываются на ряде факторов, определяющих как биологические особенности организма (возраст, состояние менструальной функции), так и биологические характеристики самой опухоли (размер опухоли, наличие метастазов опухоли в регионарные лимфоузлы, тип опухолевого роста, гистологическая принадлежность и степень злокачественности опухоли, инвазии кровеносных и лимфатических сосудов, уровень экспрессии рецепторов эстрогенов и прогестерона). Однако результаты лечения далеко не всегда являются удовлетворительными, и в настоящее время ведется поиск новых, более информативных параметров, адекватно учитывающих молекулярные механизмы развития опухолевого процесса.

Все сказанное определяет актуальность исследования метаболизма и рецепции эстрогенов в тканях при раке молочной железы, а также поиска новых маркеров прогноза заболевания, характеризующих метаболические особенности новообразования.

Цель исследования:

Изучить активность ферментов метаболизма эстрогенов и уровня рецепторов эстрогенов и прогестерона в неизмененной, опухолевой ткани, лимфогенных метастазах и оценить их прогностическую значимость.

Задачи исследования:

1. Изучить активность ферментов метаболизма эстрогенов (ароматазы, стероид сульфатазы, 2-/4-эстрогенгидроксилаз, катехол-О-метилтрансферазы и глутатион-Б-трансферазы) у больных РМЖ в неизмененной, опухолевой ткани и лимфогенных метастазах.

2. Оценить содержание рецепторов эстрогенов и прогестерона у больных РМЖ в неизмененной, опухолевой ткани, лимфогенных метастазах и сопоставить с активностью ферментов метаболизма эстрогенов.

3. Исследовать взаимосвязь между активностью ферментов метаболизма эстрогенов в изучаемых тканях и основными клинико-морфологическими параметрами у больных РМЖ.

4. Оценить прогностическую значимость активности ферментов метаболизма эстрогенов и содержания рецепторов стероидных гормонов в тканях при РМЖ.

Научная новизна

Впервые изучены в комплексе метаболизм и рецепция эстрогенов в неизмененной, опухолевой ткани и в ткани лимфогенных метастазов у больных раком молочной железы.

Показано, что синтез эстрогенов в опухоли обеспечивается стероидсульфатазой, а в перифокальных тканях превалирует ароматазный путь. В опухолях наблюдается недостаточная инактивация метаболитов эстрогенов за счет сниженной активности КОМТ, а в ткани лимфогенных метастазов метаболизм эстрогенов ингибирован из-за снижения активности КОМТ и TST.

Получены новые данные фундаментального характера, касающиеся различных путей метаболизма эстрогенов у больных РМЖ в различные возрастные периоды. Результаты исследования показали, что в возрастном периоде до 40 лет нарушены процессы инактивации эстрогенов за счет высокой активности 2,4-эстрогенгидроксилаз, и низкой активности TST и КОМТ, что, вероятно, объясняет более агрессивное течение злокачественного процесса. У женщин старше 50 лет наблюдались высокий уровень локального синтеза эстрогенов, их инактивации и рецепции, что оказывает влияние на развитие более благоприятного течения РМЖ.

Впервые получены данные о прогностической значимости активности ароматазы, 2,4-эстрогенгидроксилаз и TST в опухоли. Установлено, что низкая активность ароматазы (менее 20 фмоль/мг белка в час), высокая активность 2,4-эстрогенгидроксилаз (более 230 пмоль/мг белка в час) являются неблагоприятными факторами прогноза в отношении возникновения рецидива заболевания, а низкая активность TST (менее 40 мкмоль/мг белка в мин) является значимым критерием риска развития отдаленных метастазов при РМЖ.

Теоретическая и практическая значимость

Изучение активности ферментов метаболизма эстрогенов и уровня рецепторов женских половых гормонов расширило представления о патогенезе развития РМЖ и об их вкладе в процесс метастазирования. Новые данные фундаментального характера, касающиеся различных путей метаболизма эстрогенов у больных РМЖ в различные возрастные периоды, могут служить основой для дальнейшего изучения механизмов канцерогенеза и прогрессирования опухолевого процесса.

Выявленные изменения активности ферментов метаболизма эстрогенов могут рассматриваться в качестве параметров, характеризующих биологические особенности опухоли. Высокая активность ароматазы и стероидсульфатазы, низкая активность TST сопряжены с большим размером опухоли (Тз) и обширным поражением регионарных лимфоузлов (N2-3)- Низкая активность TST 8 наблюдается при большей степени злокачественности (G3). Доказано, что недостаточная инактивация метаболитов гормонов связана с наличием наиболее злокачественного фенотипа опухоли. Данные о прогностической значимости активности ароматазы, эстрогенгидроксилаз, TST в опухоли свидетельствуют о целесообразности использования изучаемых параметров в качестве дополнительных прогностических критериев при РМЖ.

Положения, выносимые на защиту

1. Активность ферментов метаболизма эстрогенов имеет свои отличия в ряду «неизмененная ткань - опухоль - лимфогенные метастазы». В опухоли синтез эстрогенов обеспечивается стероидсульфатазой, а в перифокальных тканях молочной железы превалирует ароматазный путь. Ингибирование процессов инактивации метаболитов эстрогенов в опухолевой ткани обусловлено снижением активности КОМТ, а в ткани лимфогенных метастазов - и КОМТ, и TST.

2. Активность ферментов метаболизма эстрогенов может использоваться в качестве критериев, характеризующих биологические особенности опухоли. Высокая активность ароматазы и низкая активность TST сопряжены с большим размером опухоли (Тз) и обширным поражением регионарных лимфоузлов (N2.3). Низкая активность TST наблюдается при большей степени злокачественности (G3).

3. Активность ферментов метаболизма эстрогенов можно рассматривать в качестве дополнительных прогностических критериев. Активность ароматазы менее 20 фмоль/мг белка в час, активность 2,4-эстрогенгидроксилаз более 230 пмоль/мг белка в час являются неблагоприятными факторами прогноза в отношении возникновения рецидива заболевания, а активность TST менее 40 мкмоль/мг белка в мин является значимым критерием риска развития отдаленных метастазов при РМЖ.

Апробация диссертации

Основные положения и результаты научных исследований были доложены и обсуждены на Российской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии», г. Томск (2004); конференции молодых ученных НИИ Онкологии «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии»", г. Томск (2004); на региональной конференции молодых ученых НИИ Онкологии «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии», г. Томск (2006); на 13 международном конгрессе с международным участием по приполярной медицине г. Новосибирск (2006); на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Онкология сегодня. Успехи и перспективы», г. Казань (2006).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ, отражающих основные положения диссертации.

Объем и структура диссертации

Заключение диссертации по теме "Онкология", Шашова, Елена Евгеньевна

выводы

1. При раке молочной железы в ткани опухоли локальный синтез эстрогенов

1 W W осуществляется преимущественно стероидсульфатазои, а в неизмененной — ароматазой. Ингибирование процессов инактивации эстрогенов в опухолевой ткани происходит за счет снижения активности катехол-О-метилтрансферазы, а в лимфогенных метастазах — и катехол-О-метилтрансферазы, и глютатион-Б-трансферазы.

2. В опухолевой ткани содержание рецепторов женских половых гормонов выше, по сравнению с неизмененной тканью и тканью лимфогенных метастазов. В опухоли активность ферментов метаболизма эстрогенов не зависит от рецепторного статуса. В перифокальных тканях активность ароматазы была на 33% ниже (р<0,05) при отрицательном ЕР статусе новообразования, по сравнению с ЕР-позитивными опухолями.

3. У пациенток в возрасте до 40 лет в ткани опухоли выявлено снижение активности ароматазы на 45% и 60%, глутатион-8-трансферазы на 60% и 20%, а также повышение активности 2,4-эстрогенгидроксилаз на 60% и 65% по сравнению с больными 41 - 50 и старше 50 лет (р<0,05), соответственно, что обуславливает недостаточную инактивацию высокореакционоспособных метаболитов эстрогенов и может характеризовать более агрессивное течение РМЖ в молодом возрасте.

4. Ферменты метаболизма эстрогенов могут рассматриваться в качестве критериев, характеризующих биологическую агрессивность РМЖ. Высокая активность ароматазы и низкая активность глутатион-S-трансферазы сопряжены с большим размером опухоли: (активность ароматазы при Т1 - 14,66±4,50; при ТЗ - 26,51±5,38 фмоль /мг белка в ч; (р<0,05); активность TST при Т1 - 51,81±21,36; при ТЗ - 21,58±3,69 мкмоль/мг белка в мин (р<0,05)) и обширным поражением регионарных лимфоузлов (активность ароматазы при N1- 21,08±2,98; при N3- 51,5±34,21 фмоль/мг белка в час (р<0,05); активность TST при N1- 48,75±9,19; при N3-16,83±3,78 мкмоль/мг белка в мин, (р<0,05)).

5. Низкая активность ароматазы в опухоли (менее 20,0 фмоль/мг белка в час) и высокая активность 2,4-эстрогенгидроксилаз (более 230,0 пмоль/мг белка в час) являются неблагоприятными факторами в отношении риска возникновения рецидивов. Для новообразований с низкой активностью глютатион-8-трансферазы (менее 20,0 мкмоль/мг белка в мин) характерен неблагоприятный прогноз в плане развития отдаленных метастазов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Рак молочной железы (РМЖ) занимает первое место в структуре злокачественных новообразований среди женского населения во всем мире. Развитие РМЖ во многом определяются метаболизмом эстрогенов [4]. Показан широкий спектр важных биологических функций, которые регулируются эстрогенами, связываясь с внутриклеточными рецепторами и активируя экспрессию различных генов [78]. К наиболее значимым эффектам эстрогенов относят активацию пролиферации [90], ингибирование процесса апоптоза, а так же стимуляцию выработки факторов роста (трансформирующий фактор роста а, эпидермальный фактор роста) [63]. Вышеперечисленные эффекты могут обуславливать развитие пролиферативных гиперпластических процессов и рака в эстроген-звисимых тканях, в которых имеются рецепторы эстрогенов.

Наибольший вклад в процесс синтеза эстрогенов вносят ферменты ароматаза и стероидсульфатаза. Ароматаза осуществляет превращение андростендиона и тестостерона в эстрон, тогда как стероидсульфатаза катализирует конверсию биологически инертного эстронсульфата в эстрон. Основной транспортной формой эстрогенов, циркулирующих в периферической крови, у женщин в постменопаузе является эстронсульфат, поэтому стероидсульфатаза имеет особое значение в патогенезе гормонозависимых опухолей в постменопаузальном периоде. Доказано, что локальное образование эстрогенов в постменопаузе является важным фактором патогенеза РМЖ по сравнению с системным уровнем циркулирующих гормонов [144]. Высокий уровень экспрессии гена ароматазы коррелировал с низкой выживаемостью и прогрессированием заболевания. Результаты анализа 10-летней выживаемости показали, что в образцах тканей опухолей больных РМЖ, имеющих регионарные и отдаленные метастазы, экспрессия гена ароматазы была значительно выше по сравнению с тканями опухолей больных, характеризующихся безметастатическим течением заболевания [47].

Гормоны, не связавшиеся с соответствующими рецепторами, подвергаются инактивации. Первоначально происходит окисление эстрогенов до высокоактивных электрофильных интермедиатов - катехолэстрогенов в реакции, катализируемой 2-,4-,16-эстрогенгидроксилазами [120]. Дальнейшее превращение катехолэстрогенов происходит в ходе реакций метилирования, осуществляемых катехол-О-метилтрансферазой (КОМТ), и коньюгирования, катализируемых различными трансферазами, наиболее важной среди которых является глутатион-Б-трансфераза (TST). Недостаточная активность этих ферментов может являться причиной накопления таких высокоактивных метаболитов эстрогенов, как катехолэстрогены, хиноны и семихиноны, которые могут связываться с ДНК и индуцировать генотоксические повреждения, мутагенез и канцерогенез [160]. Кроме того, метаболиты эстрогенов, главным образом 4- и 16-катехолэстрогены, также обладают сильным митогенным эффектом, стимулируют пролиферацию и ингибируют апоптоз в тканях молочной железы, что увеличивает риск развития рака данной локализации [120; 149]. Все это указывает на необходимость изучения ферментов инактивации эстрогенов при раке молочной железы.

В связи с вышеизложенным целью настоящей работы явилось изучение активности ферментов метаболизма эстрогенов и уровня рецепторов эстрогенов и прогестерона в неизмененной, опухолевой ткани, лимфогенных метастазах и оценка их прогностической значимости.

При этом решались следующие задачи:

В исследование было включено 85 больных РМЖ T1.4N0.3M0 в возрасте 3069 лет (средний возраст 53,62±1,08 лет), которые проходили лечение в отделении общей онкологии ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН с 2002 по 2005 год. У всех больных диагноз был морфологически верифицирован. Лечение включало в себя проведение 2-4 курсов неоадьювантной химиотерапии по схемам CMF, CAF, FAC с последующим выполнением хирургического вмешательства в объеме радикальной мастэктомии или радикальной резекции. В послеоперационном периоде проводилось 4-6 курсов адьювантной химиотерапии по одной из вышеуказанных схем, лучевая и антиэстрогенная терапия по показаниям.

В данном исследовании изучали активность ароматазы. Стероидсульфатазы, 2,4-эстрогенгидроксилазы, TST, КОМТ, а так же содержание рецепторов эстрогена и прогестерона в неизмененной, опухолевой ткани и в ткани лимфогенных метастазов, взятых из операционного материала.

При исследовании особенностей синтеза и метаболизма эстрогенов в тканях при РМЖ было обнаружено, что активность ароматазы в неизмененной ткани в 1,5 раз выше, чем в опухолевой (р<0,01). В метастазах активность ароматазы оставалась довольно высокой, и не отличалась достоверно от опухолевой ткани. Активность стероидсульфатазы увеличивалась в ряду: «неизмененная ткань-опухоль-лимфогенные метастазы» (р<0,05). Эти данные свидетельствуют о высоком локальном образовании эстрогенов не только в опухолевой и метастатической тканях, но и в неизмененной ткани молочной железы. Вероятнее всего, высокий локальный синтез эстрогенов в перифокальных тканях за счет ароматазы обусловлен тем, что опухолевая ткань использует для своего развития эстрогены из окружающей ткани, что подтверждается литературными данными [117]. При этом высокая активность стероидсульфатазы в опухоли связана с превалированием в опухоли процессов десульфирования, по сравнению с процессами ароматизации.

При изучении ферментов деградации эстрогенов наблюдалось снижение активности КОМТ в ряду «неизмененная ткань - опухоль — лимфогенные метастазы». Активность глютатионтрансферазы была выше в опухолях по сравнению с неизмененной (р<0,01) тканью и тканью лимфогенных метастазов (р<0,05), и соответственно составила 37,67±3,73; 24,48±4,05 и 25,76±3,72 мкмоль хлординитробензола/мг белка в мин. При проведении корреляционного анализа были обнаружены обратные корреляционные зависимости между активностью 2,4-эстрогенгидроксилаз и активностью ферментов локального синтеза эстрогенов в опухоли и метастазах, а так же прямые зависимости между активностью эстрогенгидроксилаз, TST и КОМТ в опухолевой и перифокальной тканях.

Можно полагать, что синтез эстрогенов в опухоли обеспечивается

1 u w преимущественно стероидсульфатазои, а ароматазныи путь превалирует в перифокальных тканях, производя эстрогены для опухоли. Инактивация эстрогенов в опухоли сопровождается высокой активностью эстрогенгидроксилаз и снижением активности КОМТ, что свидетельствует о недостаточной завершенности процесса инактивации и вероятном накоплении высокореакционных метаболитов эстрогенов. При поражении метастазами регионарных лимфоузлов инактивация катехолэстрогенов еще в большей степени ингибируется за счет снижения активности и КОМТ и TST.

Таким образом, исследование активности ферментов метаболизма эстрогенов в неизмененной, опухолевой и метастатической тканях показало высокий уровень синтеза и недостаточную инактивацию эстрогенов при прогрессировании процесса, что может свидетельствовать о важной роли метаболизма гормонов в патогенезе РМЖ, и в частности, в опухолевой прогрессии.

На основании полученных результатов мы предположили схему, характеризующую процессы инактивации катехолэстрогенов в исследованных тканях (рис.23). эстрогены I

2,4 ЭГ кэ

TST i L TST TST -*i k

KOMT

КОМТ

Метастазы в регионарных лимфоузлах

Ж ■ ■ ▼

КОМТ

Рис.23. Схема возможных механизмов инактивации катехолэстрогенов в неизмененной, опухолевой тканях и ткани регионарных лимфатических узлов, пораженных метастазами при раке молочной железы.

Примечание: КОМТ - катехол-О-метилтрансфераза;

TST - глютатионтрансфераза.

КЭ - катехолэстрогены

2,4 ЭГ - 2,4 -эстрогенгидроксилаза * * Увеличение активности фермента

•4. Снижение активности фермента

2,4-эстрогенгидроксилазы преобразуют не связавшиеся с рецепторами эстрогенов гормоны в высоко реакционоспособные катехолэстрогены, которые далее должны метаболизироваться при участии TST и КОМТ, инактивируя эти промежуточные продукты. Высокая активность эстрогенгидроксилаз и TST в опухолях по сравнению с нормальной тканью связана, скорее всего, с наличием большого количество не связавшихся с рецепторами эстрогенов в опухолях, которые метаболизируются через глютатионтрансферазный путь. Сниженная

96 активность КОМТ в опухолях по сравнению с перифокальными тканями, вероятно, является причиной недостаточной инактивации катехолэстрогенов, что может способствовать их дальнейшему окислению до чрезвычайно реакционноспособных семихинонов и хинонов, обладающих генотоксическим эффектом. При образовании лимфогенных метастазов наблюдалось ингибирование процесса инактивации катехолэстрогенов как катехол-О-метилтрансферазой, так и глютатионтрансферазой. Эти данные могут свидетельствовать о том, что опухолевая прогрессия, сопровождающаяся появлением лимфогенных метастазов, связана с недостаточной инактивацией высокореакционных продуктов метаболизма эстрогенов.

При изучении содержания рецепторов стероидных гормонов при РМЖ было обнаружено, что в неизмененной и опухолевой ткани положительный статус ЕР встречается чаще, чем в лимфогенных метастазах, тогда как во всех тканях чаще встречается отрицательный статус ПР. Во всех изученных тканях чаще встречается отрицательный статус ПР. Возможно, это связано с тем, что прогестероновые рецепторы синтезируются на основе эстрогеновых рецепторов, а при РМЖ за счет усиленного локального синтеза эстрогенов наблюдается дефицит ЕР [16; 79]. Результаты о несоответствии статуса рецепторов стероидных гормонов в первичных опухолях и ткани регионарных лимфатических узлов, пораженных метастазами могут свидетельствовать о возможном изменении уровня рецепторов женских половых гормонов в течении прогрессии заболевания. Механизм конверсии рецепторов стероидных гормонов при прогрессии болезни до сих пор не известен, но можно предположить две биологические модели, которые объясняют данное преобразование [133]. Первая модель допускает изменение статуса рецепторов в отношении доли рецептор-положительных/отрицательных клеточных клонов, первоначально представленных в высоко гетерогенной опухоли, часть из которых может затем диффундировать в регионарные лимфоузлы и отличаться меньшей гетерогенностью. Вторая модель предполагает фенотипическое изменение рецепторов в пределах единственных клеток в процессе прогрессии опухоли.

Конверсия рецепторов эстрогенов с положительных в первичных опухолях на отрицательные в метастатически измененных регионарных лимфатических узлах имеет важное практическое значение и, вероятно, может быть полезной в отношении целесообразности назначения адьювантной гормонотерапии.

При сопоставлении активности ферментов синтеза и метаболизма эстрогенов с рецепторным статусом эстрогенов и прогестерона в тканях при раке молочной железы было выявлено, что активность ферментов метаболизма эстрогенов в опухолевой ткани не изменяется в зависимости от статуса рецепторов эстрогена или прогестерона. Наши данные согласуются с результатами других исследователей [77; 100; 102] Однако, изучая другие ткани, вовлеченные в опухолевый процесс было обнаружено, что при отрицательном ЕР статусе опухоли, активность ароматазы в перифокальных тканях была на 33% ниже (р<0,05), а активность СС в ткани метастатически измененных регионарных лимфоузлов была на 89% ниже (р<0,01), чем в ЕР-положительных опухолях. Этот факт свидетельствует о разной интенсивности локального синтеза эстрогенов в тканях, вовлеченных в паталогический процесс. Полученные данные свидетельствуют о превалирующем воздействии рецепторов эстрогена на синтез гормонов в неизмененной ткани и ткани метастатически измененных регионарных лимфоузлов.

Возможно, метаболизм эстрогенов опосредован их взаимодействием с рецепторами, и вероятно, влияет на биологическую агрессивность опухоли и прогрессию заболевания. Можно предположить, что при ЕР-отрицательных опухолях молочной железы наблюдается снижение локального синтеза эстрогенов в перифокальной ткани и ткани регионарных лимфатических узлов, пораженных метастазами, так как опухоль содержит достаточное для своих нужд количество эстрогенов. А при условии отсутствия ЕР в опухоли дальнейший метаболизм эстрогенов протекает по генотоксическому пути, вызывая повреждение ДНК и способствуя более агрессивному течению опухолевого процесса.

В онкологической практике к группе прогностических факторов, определяющих возможный исход рака молочной железы относят такие клинические признаки, как возраст, состояние менструального статуса, размер первичного очага, поражение регионарных лимфатических узлов метастазами, степень злокачественности и гистологический тип опухоли. Однако, как показывает анализ литературных данных по этой проблеме, использование только клинических признаков не дает четкого ответа на вопросы, связанные с биологическими характеристиками опухоли, а, следовательно, и назначением адекватного лечения [10; 27; 73; 155].

К числу важнейших стандартных факторов, которые могут в существенной мере определять благоприятное или неблагоприятное течение заболевания, и которые обязательно учитываются при планировании комплексного лечения больных раком молочной железы, относятся возраст пациенток и состояние менструальной функции.

Результатами нашего исследования показано достоверное увеличение активности ароматазы в 2,2 раза в опухоли у больных старше 50 лет по сравнению с пациентками в возрасте до 40 лет (р<0,05). Вероятнее всего, этот факт тесно связан с наступлением климакса у этого контингента пациенток и недостаточным поступлением эстрогенов из системного кровотока. По данным литературы, в этот период наблюдается преобладание локального синтеза эстрогенов над внутригонадным [21; 60].

При изучении ферментов деградации эстрогенов наблюдалось прогрессирующее снижение суммарной 2/4-эстрогенгидроксилазной активности на 59% у больных РМЖ в возрасте 41-50 лет и на 64% у больных старше 50 лет по сравнению с пациентками в возрасте до 40 лет (р<0,05). Активность КОМТ, напротив, увеличивалась в 1,5 раза у больных в возрасте старше 50 лет, по сравнению с больными в возрасте 41-50 лет (р<0,05). Активность TST увеличивалась в возрасте 41-50 лет, по сравнению с больными до 40 лет в 2,3 раза, и в 1,6 раз по сравнению с больными старше 50 лет (р<0,05).

Полученные нами данные позволяют предположить, что развитие РМЖ в возрастном периоде до 40 лет связано с гентоксическим путем канцерогенеза. В противоположность этому, у женщин старше 50 лет, вероятно, этот путь менее выражен, и в большей мере сопряжен с превалированием промоторного пути канцерогенеза, который реализуется через усиленный локальный синтез гормонов в ароматазной реакции и дальнейшее взаимодействие эстрогенов с рецепторами (Рис. 24). Так, для больных РМЖ до 40 лет характерно наличие значительного количества эстрогенов, не связавшихся с рецепторами стероидных гормонов из-за недостатка полноценно функционирующих ЕР [24; 25], в результате чего гормоны метаболизируются через 2,4-эстрогенгидроксилазный путь, производя в большом количестве мутагенные катехолэстрогены, которые не инактивируются полностью путем метилирования КОМТ и коньюгирования с глутатионом в реакции TST. Катехолэстрогены, не инактивированные на этом этапе, через ряд превращений могут оказывать ДНК-повреждающее действие, усугубляя течение опухолевого процесса. У пациенток старше 50 лет, наибольшее значение приобретает локальный синтез эстрогенов, обеспечиваемых ароматазой, однако своевременная инактивация высокореакционных гормональных метаболитов оказывает влияние на развитие менее агрессивных форм РМЖ. Характерная для пациенток старше 40 лет низкая активность 2,4-эстрогенгидроксилаз, а так же высокие активности КОМТ и TST, по-видимому, обеспечивают полноценную инактивацию эстрогенов. Высокая активность КОМТ может быть связана с тем, что не происходит ингибирование этого фермента гидроксипроизводными, что препятствует возникновению редокс-циклов и окислительной модификации ДНК [120; 162]. Следовательно, можно полагать, что снижение суммарной 2/4 — эстрогенгидроксилазной активности, а также увеличение активностей КОМТ или TST, вероятно, являются факторами более благоприятного течения РМЖ у больных старше 50 лет по сравнению с пациентками, у которых опухоль диагносцирована в возрасте до 40 лет.

Рис. 24. Механизм развития РМЖ в различные возрастные периоды.

При изучении активности ферментов метаболизма эстрогенов в зависимости от состояния менструальной функции было показано отсутствие достоверных изменений на процессы локального синтеза в опухоли. Суммарная 2/4-эстрогенгидроксилазная активность была снижена на 25% у больных РМЖ, находящихся в состоянии постменопаузы по сравнению с пациентками в репродуктивном периоде (р<0,05). Активность КОМТ, напротив, достоверно увеличивалась в 1,8 раза в перименопаузе, и в 1,5 раза в постменопаузе по сравнению с больными, находящимися в репродуктивном периоде (р<0,05). Активность TST незначительно снижалась в постменопаузе. Следует отметить, что для больных РМЖ с сохраненной менструальной функцией была характерна высокая суммарная 2/4 - эстрогенгидроксилазная активность и низкая активность КОМТ, по сравнению с больными в пери- и постменопаузе. Обращает на себя внимание тот факт, что у больных РМЖ, находящихся в состоянии перименопаузы наблюдалось повышение активности TST и КОМТ при меньшем образовании КЭ за счет суммарной 2/4-эстрогенгидроксилазной активности, по сравнению с пациентками в постменопаузе. Вероятно, это связано с постепенным угасанием функции яичников, истощением запасов системного уровня эстрогенов и перестройкой метаболизма гормонов, что отражается на биологических характеристиках опухолей, развившихся в этом периоде.

При изучении взаимосвязи между основными клинико-морфологическими параметрами и активностью ферментов метаболизма эстрогенов было обнаружено достоверное увеличение активности ароматазы в 1,8 раз и в 1.2 раза (р<0,05) при увеличении размера первичной опухоли с Ti до Т2 и Т3. В опухолях с размером более 5 сантиметров наблюдалось достоверное снижение активности КОМТ в 1,7 раза (р<0,05), и снижение активности TST в 2 раза (р<0,01), по сравнению с опухолями размером от 2 до 5 сантиметров. Таким образом, по мере увеличения размера первичной опухоли происходит повышение активности ароматазы и снижение активности ферментов их инактивации - TST и КОМТ. Можно полагать, что снижение активности ферментов инактивации эстрогенов в тканях при РМЖ способствует более агрессивному росту опухоли.

Другим важным клиническим показателем, характеризующим распространенность опухолевого процесса, является наличие или отсутствие метастазов в регионарные лимфатические узлы (N). Для Nj было характерно наличие невысоких активностей ароматазы, СС и КОМТ, а также высокая активность 2,4-эстрогенгидроксилаз и TST в опухоли. При N2 наблюдались низкие значения для активности ферментов и синтеза, и деградации эстрогенов. При N3 были выявлены высокие активности ферментов синтеза эстрогенов и КОМТ, при значительном снижении активности 2,4-эстрогенгидроксилаз и КОМТ. Показано, что при N3 активность ароматазы была выше в 2,4 раза и в 2,5 раз, а активность СС выше в 1,3 раза и в 2 раза по сравнению с N1 и N2 (р<0,05). Рассматривая пути инактивации эстрогенов обнаружено, что активность 2/4 -эстрогенгидроксилаз снижалась в 1,4 раза, а активность TST снижалась в 1,9 раза (р<0,05) при увеличении распространенности опухолевого процесса на лимфатические узлы с Ni до N2. Наблюдалось дальнейшее снижение активности 2/4 — эстрогенгидроксилаз и TST в 5 и в 1,6 раз соответственно, а активность КОМТ увеличивалась в 2 раза при увеличении распространенности опухолевого процесса на лимфатические узлы с N2 до N3.

Полученные данные свидетельствуют о том, что процесс метастазирования в регионарные лимфатические узлы сопровождается увеличением активности ферментов локального синтеза эстрогенов и снижением активности ферментов их инактивации в опухолевой ткани. Вероятно, зарегистрированное нарушение метаболизма эстрогенов тесно связано с опухолевой прогрессией и развитием лимфагенных метастазов.

При изучении активность ферментов метаболизма эстрогенов во взаимосвязи со степенью злокачественности опухоли было обнаружено повышение активности TST в опухолевой ткани больных со второй степенью злокачественности в 2,5 раза по сравнению с опухолями 3 степени злокачественности. Данный факт указывает на то, что снижение активности TST в опухоли является неблагоприятным фактором, который влияет на агрессивное течение опухолевого процесса. Для неизмененной ткани, окружающей опухолевый очаг, было характерно снижение активности ароматазы более чем на 50% и снижение суммарной 2/4-эстрогенгидроксилазной активности примерно на 68% при опухолях 3 степени злокачественности. Это свидетельствует о важном влиянии окружающих опухоль тканей на формирование наиболее злокачественного фенотипа опухолей. Можно полагать, что формирование наиболее злокачественного фенотипа опухоли происходит под влиянием неизмененной ткани и указывает на важную роль изменений метаболизма гормонов в опухоли и перифокальных тканях на формировании более агрессивных новообразований.

Таким образом, особенности метаболизма гормонов в опухолевой и перифокальной тканях сопряжены с основными клинико-морфологическими параметрами (возраст, состояние менструальной функции, размер первичной опухоли, наличие метастазов в регионарных лимфоузлах, степень злокачественности опухоли). Представление доказательства влияния измененного метаболизма эстрогенов в опухолях и перифокальных тканях на основные клинико-морфологические характеристики дают основание для того, чтобы рекомендовать их в качестве дополнительных критериев оценки возможного прогноза заболевания.

Для оценки прогностической значимости статуса рецепторов стероидных гормонов и активности ферментов метаболизма эстрогенов в тканях при раке молочной железы использовался однофакторный анализ признаков, который был выполнен с использованием критерия Гехана-Вилкоксона (Survival Analysis, Statistica 6.0). Были проанализированны результаты безрецидивной и безметастатической выживаемости в группе больных раком молочной железы. Проведенный анализ выживаемости показал, что показатели 2-летней безрецидивной выживаемости лучше при возрасте больных старше 40 лет, активности ароматазы в опухоли более 20 фмоль/мг белка в час, активности 2,4 -эстрогенгидроксилаз в опухолях менее 230 пмоль/ мг белка в час и положительном ЕР статусе первичной опухоли. Показатели 2-летней безметастатической выживаемости лучше при возрасте больных старше 40 лет, отсутствии метастазов в регионарных лимфоузлах и активности TST в опухоли более 40 мкмоль/мг белка в час.

Полученные результаты являются принципиально новыми и позволяют использовать активность некоторых ферментов метаболизма эстрогенов в опухолевой ткани, наряду с уже известными стандартными показателями для прогноза заболевания. Изученные нами показатели, в частности, активность ароматазы, суммарная 2,4-эстрогенгидроксилазная активность, активность TST в опухоли могут явиться характеристиками биологических особенностей опухоли и использоваться в прогнозировании возможного исхода заболевания. Именно совместное применение факторов, отражающих биологические особенности организма больного и критериев, характеризующих молекулярно-биологические особенности опухолевой ткани, позволят с большей степенью вероятности предпологать возможный исход заболевания у больных РМЖ.

Таким образом, выполненное исследование свидетельствует о том, что ферменты метаболизма эстрогенов играют важную роль в патогенезе рака молочной железы, оказывают значимое влияние на характер течения и прогноз заболевания, а также могут использоваться в качестве дополнительных критериев, характеризующих биологические особенности опухоли.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Шашова, Елена Евгеньевна, 0 год

1. Активность антиоксидантных ферментов в тканях опухолей молочной железы с различной выраженностью процессов пролиферации / Л.П.Смирнова, И.В. Кондакова, Е.М.Слонимская, и др // Сиб. онколог, журнал. 2002. - № 3-4. - С.90.

2. Берштейн, Л.М. Полиморфизм генов ферментов стероидогенеза и риск развития злокачественных опухолей / Л.М. Берштейн, Е.Н. Имянитов // Вопр. онкол. -1999. Т.45. - № 3. - С.213-218.

3. Берштейн, Л.М. Гормональный канцерогенез / Л.М. Берштейн // Природа. -2000.-№3.-С. 1-9.

4. Берштейн, Л.М. Гормональный канцерогенез / Л.М.Берштейн. СПб : Наука, 2000. - 199с.

5. Берштейн, Л.М. Возраст, факторы внешней среды и гормональный канцерогенез / Л.М. Берштейн // Вопр. онкол. 2001. - Т.47. - № 2. - С. 148155.

6. Берштейн, Л.М. Феноменальный эстроген и эстрогенный феномен / Л.М. Берштейн // Природа. 2003. - № 9. - С. 14-23.

7. Биохимия человека / Р. Марри, Д. Греннер, П. Мейес, В. Родуэлл. М. : Мир, 1993. - 415с. - в 2-х томах. Т2.

8. Боровиков, В. П. STATISTIC А статистический анализ и обработка данных в среде Windows / В. П. Боровиков, П. П. Боровиков. - М.: Филин, 1998. -608 с.

9. Генетический полиморфизм и вариабельность метаболизма стероидных гормонов: связь с риском развития рака молочной железы / V. Nedelcheva Kristensen, N.Harada, T.Kristensen, A.L. Borresen-Dale // Вопр.онкол. 2001. -T.47. - № 2. - С.156-159.

10. Герштейн E. С. Тканевые маркеры как факторы прогноза при раке молочной железы / Е. С. Герштейн, Н. Е. Кушлинский // Практическая онкология. 2002. - Т 3, № 1. - С. 38-44.

11. Давыдов М. И. Злокачественные новообразования в России и странах СНГ / М. И. Давыдов, Е. М. Аксель. Москва: -2002. - 120 с.

12. Дильман, В.М. Четыре модели медицины / В.М. Дильман. JI : Москва, 1987.-287с.

13. Изучение содержания ДНК методом проточной цитометрии и рецепторов стероидных гормонов при раке молочной железы / Г.Н. Зубрихина, Э.В.Кузьмина, Л.С.Бассалык, Н.И. Муравьева // Вопросы онкологии. 1989. -Т.35. - № 10. - С.1179 - 1185.

14. Ингибирующее действие прогестерона на глутатион-8-трансферазу Р1-1 и его антипролиферативный эффект на клетки линии к562 эритролейкемии человека / Е.В.Калинина, М.Д. Новичкова, Н.П.Щербак, А.Н. Саприн // Вопр. онкол. 2000. - Т.46. - № 1. - С.68-73.

15. Киселев, В.И. Молекулярные механизмы регуляции гиперпластических процессов /В.И.Киселев, А.А.Ляшенко. М. : изд - во ДимитрейдГрафикГрупп, 2005. - С. 348.

16. Коваленко, И.Г. Катехолэстрогены: образование, свойства и роль в канцерогенезе / И.Г. Коваленко, О.С. Колесник, JI.M. Берштейн // Вопр. Онкол. 1997. - Т.43. - № 3. С. 257-262.

17. Копнин, Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров : ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза / Б.П.Копнин // Биохимия. 2000. -Т.65. - № 1. - С.5-33.

18. Лихачев, А.Я. Роль репарации ДНК в химическом канцерогенезе / А.Я. Лихачев // Вопр. онкол. 1987. -Т.ЗЗ. - № 1. - С.3-11.

19. Молекулярно-биологические и биохимические особенности рака молочной железы / К.П.Хансон, Л.М.Берштейн, Е.Н.Имянитов, и др. // Вестник РАМН.- 1998. № 1.-С. 15-19.

20. Остроумова, М.Н. Возможность использования N — ацетилцистеина в профилактике рака / М.Н. Остроумова, И.Г. Коваленко, Л.М.Берштейн // Эксперим. онкол. 1994. - Т. 16. - С. 96 - 101.

21. Определение рецепторов стероидных гормонов в гормонозависимых опухолях для назначения эндокринной терапии (методические рекомендации) / Л.С. Бассалык, Н.И. Муравьева, З.В. Кузьмина и др. -Москва, 1987.-16с.

22. Прогностическое значение рецепторов стероидных гормонов в опухолях молочной железы / Л.С.Бассалык, Н.И.Муравьева, К.Д. Смирнова, и др. // Вопр. онкол. 1982. - № 5. - С. 82 - 88.

23. Рецепторы эстрогенов в первичной опухоли у больных раком молочной железы / Е.В. Цырлина, В.М. Моисеенко, Т.Р. Борноева и др. // Вопр. онкол.- 1984.-№4.-С. 29-33.

24. Рецепторы стероидных гормонов в злокачественных опухолях молочной железы у человека / Л.С.Бассалык, Н.И.Муравьева, З.В.Кузьмина, и др. // Вестн. А.М.Н. СССР.-1981.-№ 12.-С. 19-23.

25. Рецепторы стероидных гормонов и выживаемость больных раком молочной железы / О.А. Иванова, Е.В.Цырлина, В.М.Моисеенко, В.Ф.Семиглазов // Вопр. онкол. 1986. - Т.32. - № 6. - С. 71 - 76.

26. Рецепторы эстрадиола и прогестерона в индуцированных ДМБА опухолях молочной железы у крыс при циклических гормональных воздействиях / Н.С.Картавова, Н.С.Гутник, Д.П.Бурлака, О.И.Дасюкевич // Эксперим. Онкология. 1986. - Т. 8. - № 1. С. 54 - 58.

27. Сметник, В.П. Половые гормоны и молочная железа / В.П. Сметник // Гинекология. 2000. - Т.2. - № 5. - С. 7-14.

28. Содержание рецепторов эстрадиола-17Р, прогестерона и глюкокортикоидов у больных доброкачественными заболеваниями молочной железы / Л.С.Бассалык, З.В.Кузьмина, Н.И.Муравьева, и др. // // Вопр. онкол. 1982. - Т.28. - № 7. - С. 3 - 6.

29. Содержание рецепторов прогестерона, глюкокортикоидов и глицирризиновой кислоты в опухолевой и нормальной ткани молочной железы человека. / Т.Н.Ильичева, Т.Р.Проняева, А.А.Сметанников, А.Г.Покровский // Вопр. онкол. 1998. - Т.44. - № 4. - С. 390 - 394.

30. Сравнительные особенности гормонально метаболического статуса у больных с рецепторнегативными новообразованиями молочной железы и эндометрия / Л.М. Берштейн, Е.В. Цырлина, И.Г. Коваленко и др. // Вопр. онкол. - 2003. - Т.49. - № 6. - С. 716 - 724.

31. Стенина, М.Б. Гормонотерапия диссеменированного рака молочной железы / М.Б. Стенина // Практическая онкология. 2000. - № 2. - С. 12-18.

32. Турусов, B.C. Еще раз о проблеме порога в химическом канцерогенезе / B.C. Турусов, В.Н.Ракитский, Ю.А.Ревазова // Вопр. онкол. 1998. -Т.44. - № 4. -С.468-476.

33. Эренпрейс, Я.Г. Современные концепции опухолевого роста / Я.Г. Эренпрейс. Рига : Знание, 1987. - 120с.

34. An association between the allele coding for a low activity variant of catechol-O-methyltransferase and the risk for breast cancer / J. A. Lavigne, K. J. Helzlsouer, H-Y. Huang, et al. // Cancer Res. 1997. - Vol. 57. - P. 5493-5497.

35. Analysis of nucleoside-estrogen adducts by LC-ESI-MS-MS / C.Van Aerden, L. Debrauwer, J. C. Tabet, A. Paris // Analyst. 1998. - Vol. 123. - P. 2677-2680.

36. Aromatase activity and interleukin-6 production by normal and malignant breast tissues / A Purohit, M.W. Ghilchik, L. Duncan et al. // J Clin Endocrinol Metab. -1995. Vol. 80. - Issue 10. - P. 3052-3058.

37. Aromatase in the context of breast and endometrial cancer. A review. / V.H. Jongen, H. Hollema, A.G. Van Der Zee, M.J. Heineman // Minerva Endocrinol. — 2006.-Vol. 31(1).-p. 47-60.

38. Assotiation between glutathion-s-transferase Ml, PI, and T1 genetic polymorphisms and dewelopment of breast cancer / K.J.Helzlouser, O.Selmin, H-Y. Huang, et al. // J Natl Cancer Inst. 1998. - Vol. 90. - P.512-518.

39. Assessment of hormone dependence of comedo ductalcarcinoma in situ of the breast / P.A. Holland, W.F. Knox, C.S. Potten, et al. // J.Natl. Cancer Inst. 1997. -Vol. 89.-P. 1059-1065.

40. A unified theory of carcinogenesis based on order disorder transitions in DNA structure as studied in the human ovary and breast / D. Malins, N.L. Polisaar, S. Schaefer, et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. (USA). - 1998. - Vol. 95. - P. 7637 -7642.

41. Auvray, P. Preclinical evaluation of aromatase inhibitors antitumor activity / P.Auvray, F.Bichat, P.Genne // Bull. Cancer. 2000. - Vol. 87. - Spec Nopp. - P. 7-22.

42. Ball, P. Formation, metabolism and physiologic importance of catecholestrogens / P. Ball, R.Knuppen // Amer. J. Obstet. and Gynecol. 1990. - Vol. 163. - P. 2163 -2176.

43. Barth, A. Influence of subchronic administration of oestrone-3-O-sulphamate on oestrone sulphatase activity in liver, spleen and white blood cells of ovariectomized rats / A. Barth, W. Rommer, M. Oettel // Arch. Toxicol. 2000. -Vol. 74.-P. 366-371.

44. Bulun, S.E. Regulation of aromatase expression in human tissues / S.E. Bulun, E.R. Simpson // Breast Cancer Res Treat. 1994. - Vol. 30. - Issue 1. - P. 19-29.

45. Catechol-O-methyltransferase and breast cancer risk / R. Millikan, G.S.Pittman,

46. C.K. Tse , et al. // Carcinogenesis. 1998. - Vol. 19 № 11. - P. 1943 - 1947.

47. Cavalieri, E. L. Initiation of cancer and other diseases by catechol ortho-quinones : a unifying mechanism / E. L. Cavalieri, E. G. Rogan, D. Chakravarti // Cell. Mol. Life Sci. 2002. - Vol.59. - P.665-681.

48. Carcinogenic activities of various steroidal and nonsteroidal estrogens in the hamster kidney : relation to hormonal activity and cell proliferation / J.J. Li, S.A. Li, T.D.Oberley, J.A.Parsons // Cancer Res. 1995. - Vol. 55. - P.4347 - 4351.

49. Combined COMT and GST genotypes and hormone replacement therapy associated breast cancer risk / K. Mitrunen, V. Kataja, M. Eskelinen, et al. // Pharmacogenetics. 2002. - Jan. - P.67-72.

50. Combined effect of GSTM1, GSTT1, and COMT genotypes in individual breast cancer risk. / S.K. Park , D.S. Yim , K.S. Yoon , et al. // Breast Cancer Res Treat.- 2004. Vol. 88(1). - P. 55-62.

51. Comparison of the ligand binding specificity and transcript tissue distribution of estrogen receptors a and p. / GG Kuiper, B. Carlsson, K. Grandien, et al. // Endocrinology. 1997. - Vol 138. - P. 863 - 870.

52. Comparison of possible carcinogenic estradiol metabolites: Effects on proliferation, apoptosis and metastasis of human breast cancer cells. / H Seeger,

53. D. Wallwiener, E. Kraemer, A.O. Mueck // Maturitas. 2006. - vol. 54(1). - p. 72-77.

54. Cowley, S.M. A comparison of transcriptional activation by ER a and ER P / S.M. Cowley, Parker M.G. // J.Steroid. Biochem. Mol. Biol. 1999. - Vol. 69. - P. 165 - 175.

55. Clarke, R. The process of malignant progression in human breast cancer. / R. Clarke, R.B. Dickson, N.Brunner // Ann Oncol. 1990. - Vol.1. - P. 401 - 407.

56. Cytochrome P450 1A1 and glutathione-s-transferase (Ml) genetic polymorphisms and postmenopausal breast cancer risk / C.B. Ambrosone, J.L. Freudenheim, S.Graham et al. // Cancer Res. 1995. - Vol. 55. - P. 3483-3485.

57. Developmental, Cellular, and Molecular Basis of Human Breast Cancer / J. Russo, Y.-F. Hu, X.Yang, I. H. Russo // J Natl Cancer Inst Monogr. 2000. - № 27. chapter 1.-P. 17-37.

58. Defining etiologic heterogeneity in breast cancer using genetic biomarkers / T.R. Rebbeck, A.H. Walker, C.M. Phelan, et al. // Etiology of Breast and Gynecological Cancers. 1997. - P. 53-61.

59. Determination of DNA synthesis, estrogen receptors, and carcinoembryonic antigen in isolated cellular subpopulations of human breast cancer / O.L. Podhajcer, A.I. Bravo, I. Sorin, et al. // Cancer. 1986. - Vol.58. - P. - 720729.

60. Effects of young age at presentation on survival in breast cancer / N. S. Saghir, M. Seoud, M. K. Khalil, et. Al. // B.M.C. Cancer. 2006. - Vol. 6. - p. 194 - 202.

61. Estrogen receptor status is the most important prognostic factor in breast cancer with ten or more positive lymph nodes/ / Y. Ogawa, T. Ishikawa, B.Nakata et al. // Int. J. Clin. Oncol. 1999. - Vol. 4. - P. 170 - 174.

62. Estrogen receptors in bilateral breast cancer / I.M. Holdaway, B.H. Mason, R.C. Bennett, et al. // Cancer. 1988. - Vol.62. - Issue 1. - P. 109 - 113.

63. Estrogen and progesterone receptors in human breast cancer. Correlation with histologic subtype and degree of differentiation. / R.H. Mohammed , D.J. Lakatua, E. Haus , W.J Yasmineh // Cancer. 1986. - Vol.58. - Issue 5. - P.1076 - 1081.

64. Estrogens as endogenous genotoxic agents: DNA adducts and mutations. / E.Cavalieri, K.Frenkel, J. G. Liehr et al // JNCI Monograph 27. 2000 : estrogens as endogenous carcinogens in the breast and prostate. - P. 75-93,

65. Estrogen receptors a and (3 form heterodimers on DNA. / S.M. Cowley, S. Hoare, S. Mosselman, MG.Parker// J Biol Chem. -1997. Vol. 272. - P. 19858 - 62.

66. Estrone and dehydroepiandrosterone sulfatase activities and plasma estrone sulfate levels in human breast carcinoma. / O. Prost, M.O. Turrel, N. Dahan, et al // Cancer Res. 1984. - Vol. 44(2). - p. 661-664.

67. Estrogen Sulfotransferase and Steroid Sulfatase in Human Breast Carcinoma / T. Suzuki, T. Nakata, Y. Miki et al. // Cancer Res. 2003. - Vol. 63. - p. 2762-2770.

68. Expression of estrogen, progesterone and epidermal growth factor receptors in primary and metastatic breast cancer. / T. van Agthoven, M. Timmermans, L.C. Dorssers, S.C. Henzen-Logmans // Int J Cancer. 1995. - Vol.63. - Issue 6. - P. 790-793.

69. Expression of glutathione S-transferase Bl, B2, Mu and Pi in breast cancers and their relationship to oestrogen receptor status. / A.F. Howie , W.R. Miller, R.A. Hawkins , et al. // Br J Cancer. 1989. - Vol. 60 (6). P. 834-837.

70. Formation of the depurinating 4-hydroxyestradiol (4-OHE2)-l-N7Gua and 4-OHE2-l-N3Ade adducts by reaction of E2-3, 4-quinone with DNA. / K. M.Li, P. D.Devanesan, E. G. Rogan, E. L. Cavalieri // Proc. Am. Assoc. Cancer Res. -1998.-Vol. 39.-P. 636-642.

71. Factors influencing the effect of age on prognosis in breast cancer: population based study / N. Kroman, M. Jensen, J. Wohlfahrt et al. // B.M.J. 2000. - Vol. 320.-p. 474-479.

72. Genetic polymorphisms in catechol-O-methyltransferase, menopausal status, and breast cancer risk / P.A. Thompson, P.G. Shields, J.L. Freudenheim, et al. // Cancer Res. 1998. - Vol. 58 № 10. - P. 2107 - 2110.

73. Genetic variants of CYP19 (aromatase) and breast cancer risk. / V.N. Kristensen, N. Harada, N.Yoshimura, et al. // Oncogene. 2000. - Vol. 19 №10. - P. 1329 -1333.

74. Genetic polymorphisms in glutathione-S-transferase genes (GSTM1, GSTT1, GSTP1) and survival after chemotherapy for invasive breast carcinoma. / G. Yang, X.O. Shu, Z.X. Ruan, et al. // Cancer. 2005. - Vol.l03(l). - P. 52-58.

75. Glutathione transferase activity and isoenzyme composition in primary human breast cancers / T.C. Shea, G. Claflin, K.E. Comstock, et al. // Cancer Res. 1990. -Vol 50, № 21. P. 6848 - 6853.

76. Glutathione S-transferase activity in human breast tumors / A.I. Colovai, A. Stoica , S.A. Cinca, et al. // Neoplasma. 1992. - vol. 39(4). -p. 249-254.

77. Glutathione S-transferase Ml null genotype: lack of association with tumour characteristics and survival in advanced breast cancer / S. Lizard-Nacol, B. Coudert, P.Colosetti, et al. // Breast Cancer Res. 1999. - Vol. 1. - P. 81-87.

78. Guengerich, F.P. Reactions and significance of cytochrome P-450 enzymes / F.P. Guengerich // J. of Biolog. Chem